光遺傳技術(shù)介紹:
光遺傳學(xué)(Optogenetics),也稱光刺激基因工程(optical stimulation plus genetic engineering)。光遺傳系統(tǒng)是一種通過使用光學(xué)技術(shù)和遺傳技術(shù)來實(shí)現(xiàn)控制細(xì)胞行為的方法。光遺傳學(xué)技術(shù)克服了傳統(tǒng)的只用光學(xué)手段控制細(xì)胞或有機(jī)體活動的許多缺點(diǎn),為神經(jīng)科學(xué)提供了一種變革性的研究手段。
該技術(shù)方法源于2010年Nature Methods雜志上的一篇文章。即通過特定波長的光刺激來控制表達(dá)了光敏感蛋白細(xì)胞的發(fā)放或抑制。目前,光遺傳學(xué)最流行的研究方法是由激光器或LED光源發(fā)出一定波長的光,通過光纖傳輸?shù)綄?shí)驗(yàn)動物的大腦,通常為小鼠或大鼠。該技術(shù)作為一個工具使動物神經(jīng)元產(chǎn)生神經(jīng)興奮,觀察和采集動物神經(jīng)元放電、行為變化和生理變化等。而且據(jù)報(bào)道該光敏感蛋白的基因的表達(dá)不僅限于神經(jīng)元,還可以在動物的其它類型的細(xì)胞中表達(dá),如心肌細(xì)胞及其它可以產(chǎn)生跨膜電位的細(xì)胞。
光遺傳實(shí)驗(yàn)流程:
(1)將光敏感蛋白基因在目標(biāo)細(xì)胞內(nèi)表達(dá):目前已經(jīng)有公司銷售帶有光敏感蛋白基因的載體病毒。通過直接注射等方式將病毒轉(zhuǎn)染進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。病毒攜帶的啟動子等工具基因會將光敏感蛋白表達(dá)在細(xì)胞膜上。
(2)植入光纖導(dǎo)管或光遺傳電極:向注射病毒的位置植入光纖導(dǎo)管、光遺傳電極、帶有給藥管的光纖導(dǎo)管等。通過光纖導(dǎo)管輸入特定光刺激,以啟動或抑制光敏感細(xì)胞。
(3)收集光刺激的結(jié)果:光刺激之后的細(xì)胞、組織或生物體會出現(xiàn)相應(yīng)的變化。例如最直觀的結(jié)果就是通過光遺傳電極記錄神經(jīng)元的Spike放電和LFP局部場電位,還有動物體的行為變化、生理變化等。
光遺傳系統(tǒng)(光刺激)基本構(gòu)成:
(1)各種波長的光源(近紫外385nm、近紫外405nm、藍(lán)色455nm、藍(lán)色465nm、青色505nm、綠色515nm、琥珀色595nm、橙色625nm、紅色635nm、紅外850nm、紅外940nm、白色5500K等波長;激光光源或LED光源,輸出穩(wěn)定、精確控制光波長)
(2)單光或多光光源驅(qū)動控制器(調(diào)節(jié)發(fā)光強(qiáng)度和時間)
(3)旋轉(zhuǎn)接頭(光電換向器/給藥換向器/單光換向器/多光換向器)
(4)各種光纖跳線、光纖套管和光纖頭
(5)光能量測量器
(6)多通道神經(jīng)信號記錄系統(tǒng)
(7)多通道光刺激電極
光遺傳技術(shù)應(yīng)用領(lǐng)域:
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